GeneMATRIX Universal RNA/miRNA Saflaştırma Kiti

GeneMATRIX Universal RNA/miRNA Purification Kit, hayvan dokuları, bitki örnekleri ve hücre kültürlerinden toplam RNA'nın, 200 nükleotidden kısa küçük RNA molekülleri (small RNA) ile birlikte saflaştırılması veya yalnızca küçük RNA fraksiyonunun izolasyonu için geliştirilmiştir.

Kit, özellikle 15–30 nükleotid uzunluğundaki mikroRNA'ların (miRNA) etkin şekilde geri kazanılmasını sağlayacak şekilde optimize edilmiştir. Maksimum 100 µg'a kadar toplam RNA elde edilebilir ve saflaştırılan RNA/miRNA, ek bir saflaştırma işlemine gerek kalmadan doğrudan ileri moleküler biyoloji uygulamalarında kullanılabilir.

Yöntem, fenol ve kloroform kullanımını gerektirmez, böylece daha güvenli ve pratik bir izolasyon süreci sunar.

Çalışma Prensibi

Örnekler önce özel lizis ve denatürasyon tamponları ile parçalanır. Bu tamponlar hücreleri etkili şekilde lizise uğratırken RNaz enzimlerini hızla inaktive ederek RNA'nın bütünlüğünü korur.

Lizat daha sonra homojenizasyon spin kolonundan geçirilir. Bu aşamada genomik DNA mekanik olarak parçalanır, lizatın viskozitesi azaltılır ve büyük DNA parçaları uzaklaştırılır.

Ardından eklenen etanol, RNA ve küçük RNA moleküllerinin GeneMATRIX silika membranına seçici olarak bağlanmasını sağlar.

Örnek RNA bağlama kolonuna aktarıldığında RNA ve miRNA membrana bağlanırken, proteinler, DNA kalıntıları ve diğer kirleticiler uzaklaştırılır. İki yıkama adımının ardından yüksek kaliteli RNA/miRNA, RNaz içermeyen saf su ile elüe edilir.

Kit ile 100 µg'a kadar toplam RNA elde edilebilir. İzole edilen RNA/miRNA, etanol çöktürme işlemine gerek duyulmadan doğrudan sonraki analizlerde kullanılmaya hazırdır.

Kullanım Alanları

Saflaştırılan RNA ve miRNA aşağıdaki uygulamalarda kullanılabilir:

• miRNA ekspresyon analizleri
• RT-PCR ve qRT-PCR
• miRNA qPCR analizleri
• Small RNA Sequencing
• RNA-Seq ve NGS
• cDNA sentezi
• Gen ekspresyon analizleri
• Transkriptom çalışmaları
• Biyobelirteç (biomarker) araştırmaları

Avantajları

• Toplam RNA ile birlikte small RNA ve miRNA izolasyonu sağlar.
• 15–30 nükleotid uzunluğundaki miRNA'ların yüksek verimle geri kazanılmasını destekler.
• İstenildiğinde yalnızca küçük RNA fraksiyonu izole edilebilir.
• 100 µg'a kadar toplam RNA verimi sunar.
• Fenol ve kloroform kullanılmaz.
• Etanol çöktürme gerektirmez.
• GeneMATRIX silika membran teknolojisi sayesinde yüksek saflık, yüksek geri kazanım ve tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.