GeneMATRIX Universal RNA Saflaştırma Kiti

GeneMATRIX Universal RNA Purification Kit, hayvan, bitki ve mantar dokuları, hücre kültürleri, bakteriler, mayalar, tam kan örneklerinden elde edilen lökositler ve diğer birçok biyolojik örnekten toplam RNA'nın hızlı, etkili ve yüksek saflıkta izolasyonu ile saflaştırılması için geliştirilmiştir.

Kit sayesinde elde edilen RNA, yüksek saflık ve bütünlüğe (RIN – RNA Integrity Number) sahip olup, genomik DNA ve diğer kirleticilerden etkin şekilde arındırılmıştır.

Saflaştırılan RNA aşağıdaki kirleticileri içermez:

• Genomik DNA
• Proteinler
• Lipitler (yağlar)
• Boyar maddeler
• Deterjanlar
• Enzimatik reaksiyonları inhibe eden organik bileşikler
• Tampon çözeltiler (buffer)
• Tuzlar
• İki değerlikli katyonlar (Ca²⁺, Mg²⁺ vb.)
• Diğer safsızlıklar

Bu yüksek saflık seviyesi sayesinde izole edilen RNA, herhangi bir ek saflaştırma veya etanol çöktürme işlemine ihtiyaç duyulmadan moleküler biyoloji uygulamalarında doğrudan kullanılabilir.

Çalışma Prensibi

İlk aşamada örnek, güçlü denatüre edici ajanlar içeren özel bir lizis tamponu ile parçalanır (lizis işlemi gerçekleştirilir).

Lizis tamponunun eklenmesiyle birlikte hücrelerde bulunan RNaz (RNase) enzimleri anında inaktive edilir. Böylece RNA'nın parçalanması önlenerek örneğin bütünlüğü korunur.

Daha sonra lizat, özel olarak tasarlanmış homojenizasyon spin kolonundan geçirilir. Bu işlem sırasında:

• Genomik DNA mekanik olarak parçalanır (shearing).
• Lizatın viskozitesi önemli ölçüde azaltılır.
• Büyük DNA parçaları uzaklaştırılarak sonraki saflaştırma adımlarının verimliliği artırılır.

Homojenizasyon kolonundan geçen sıvı daha sonra RNA'ya yüksek seçicilik gösteren bağlama (binding) spin kolonuna aktarılır.

Kısa süreli santrifüj işlemi sırasında:

• RNA molekülleri silika matrikse seçici olarak bağlanır.
• Proteinler, DNA kalıntıları, hücresel artıklar ve diğer kirleticiler kolondan geçerek uzaklaştırılır.

Ardından gerçekleştirilen yıkama adımları sayesinde matriks üzerinde kalabilecek eser miktardaki kirleticiler etkin şekilde temizlenir.

Son aşamada yüksek kaliteli RNA, RNaz içermeyen saf su (RNase-free water) ile elüe edilerek membrandan ayrılır.

Kit, 200 bazdan daha uzun toplam RNA için 125 µg'a kadar verim sağlayabilmektedir.

Elde edilen RNA, herhangi bir etanol çöktürme (ethanol precipitation) işlemine gerek kalmaksızın doğrudan sonraki moleküler biyoloji uygulamalarında kullanılmaya hazırdır.

Kullanım Alanları

Saflaştırılan yüksek kaliteli RNA aşağıdaki uygulamalarda doğrudan kullanılabilir:

• RT-PCR (Ters Transkripsiyon PCR)
• Gerçek Zamanlı RT-PCR (qRT-PCR)
• RNA dizileme (RNA Sequencing)
• Yeni Nesil Dizileme (NGS)
• Gen ekspresyon analizleri
• Transkriptom analizleri
• cDNA sentezi
• Mikroarray çalışmaları
• Diğer RNA temelli moleküler biyoloji uygulamaları

Avantajları

• Hayvan, bitki, mantar, bakteri, maya, hücre kültürü ve kan örnekleri dahil çok geniş örnek yelpazesiyle uyumludur.
• RNaz enzimlerini hızlı şekilde inaktive ederek RNA bütünlüğünü korur.
• Homojenizasyon kolonu sayesinde genomik DNA parçalanarak viskozite azaltılır ve saflaştırma verimi artırılır.
• Yüksek saflıkta, yüksek bütünlükte (yüksek RIN değerine sahip) RNA elde edilmesini sağlar.
• Genomik DNA ve diğer kirleticiler etkin şekilde uzaklaştırılır.
• 200 bazdan uzun toplam RNA için 125 µg'a kadar yüksek verim sunar.
• Etanol çöktürme gibi ek saflaştırma işlemlerine gerek bırakmaz.
• Güvenilir GeneMATRIX silika membran teknolojisi sayesinde yüksek geri kazanım oranı ve tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.